Molecular Basis of Inheritance

ডিঅক্সিরাইবোনিউক্লিক অ্যাসিড (DNA) এবং রাইবোনিউক্লিক অ্যাসিড (RNA) হলো অসংখ্য মনোমারিক এককের সমন্বয়ে গঠিত পলিমার, যাদের নিউক্লিওটাইড বলে। প্রতিটি নিউক্লিওটাইড তিনটি প্রধান রাসায়নিক উপাদান নিয়ে গঠিত:

• পেন্টোজ শর্করা (Pentose Sugar): ৫-কার্বনযুক্ত বলয়াকার শর্করা; ডিএনএ-তে থাকে $eta$-D-২-ডিঅক্সিরাইবোজ (যার ২' কার্বনে কোনো অক্সিজেন পরমাণু থাকে না) এবং আরএনএ-তে থাকে $eta$-D-রাইবোজ (যার ২' কার্বনে একটি সক্রিয় $-OH$ গ্রুপ থাকে, যা আরএনএ-কে রাসায়নিকভাবে সক্রিয় ও সহজে ভঙ্গুর করে)।
• নাইট্রোজেনঘটিত ক্ষারক (Nitrogenous Bases): হেটেরোসাইক্লিক রিং বিশিষ্ট জৈব ক্ষারক:
  • পিউরিন (Purines - দ্বি-বলয়ী): অ্যাডেনিন ($A$) এবং গুয়ানিন ($G$), ডিএনএ ও আরএনএ উভয়েই থাকে। শর্করার ১' কার্বনের সাথে $N৯-C১'$ $eta$-N-গ্লাইকোসিডিক বন্ধন দ্বারা যুক্ত হয়।
  • পিরিমিডিন (Pyrimidines - একক-বলয়ী): সাইটোসিন ($C$), থাইমিন ($T$ কেবল ডিএনএ-তে) এবং ইউরাসিল ($U$ কেবল আরএনএ-তে)। শর্করার সাথে $N১-C১'$ $eta$-N-গ্লাইকোসিডিক বন্ধন দ্বারা যুক্ত হয়। রাসায়নিকভাবে থাইমিন হলো ৫-মিথাইলইউরাসিল, যার মিথাইল গ্রুপ ডিএনএ-কে অতিরিক্ত রাসায়নিক স্থায়িত্ব প্রদান করে।
• ফসফেট গ্রুপ (Phosphate Group): ফসফরিক অ্যাসিড ($H_3PO_4$) নিউক্লিওসাইডের ৫'-কার্বনের সাথে এস্টার বন্ধনে যুক্ত থাকে। দুটি পাশাপাশি নিউক্লিওটাইড পরস্পরের সাথে ৩' $ o$ ৫' ফসফোডাইএস্টার বন্ধন দ্বারা যুক্ত হয়ে শর্করা-ফসফেটের মেরুদণ্ড (Backbone) তৈরি করে।

আরউইন চারগ্যাফ ১৯৫০ সালে দ্বিসূত্রী ডিএনএ বিশ্লেষণের মাধ্যমে আবিষ্কার করেন যে যেকোনো দ্বিসূত্রী ডিএনএ অণুতে ক্ষারকগুলির পরিমাণ একটি নির্দিষ্ট গাণিতিক নিয়ম মেনে চলে (স্মর্তব্য: এটি একসূত্রী ডিএনএ বা আরএনএ-তে প্রযোজ্য নয়):

• ১. ক্ষারক সমতা: অ্যাডেনিনের মোলার পরিমাণ থাইমিনের সমান ($[A] = [T]$), এবং গুয়ানিনের মোলার পরিমাণ সাইটোসিনের সমান ($[G] = [C]$)।
• ২. পিউরিন ও পিরিমিডিন সমতা: মোট পিউরিনের পরিমাণ মোট পিরিমিডিনের সমান, অর্থাৎ $[A] + [G] = [T] + [C]$। সুতরাং, $rac{[A] + [G]}{[T] + [C]} = ১.০$।
• ৩. প্রজাতি-নির্দিষ্ট ক্ষারক অনুপাত: $rac{[A] + [T]}{[G] + [C]}$ অনুপাতটি একটি নির্দিষ্ট প্রজাতির ক্ষেত্রে সর্বদা ধ্রুবক থাকে, কিন্তু প্রজাতিভেদে ভিন্ন হয় (যেমন: মানুষের ক্ষেত্রে এটি প্রায় ১.৫২ অর্থাৎ AT-সমৃদ্ধ; আর *E. coli* ব্যাকটেরিয়ায় এটি প্রায় ০.৯৩ অর্থাৎ GC-সমৃদ্ধ)।

রোজালিন্ড ফ্র্যাঙ্কলিন ও মরিস উইলকিন্সের এক্স-রে ক্রিস্টালোগ্রাফি এবং চারগ্যাফের সূত্রের ওপর ভিত্তি করে জেমস ওয়াটসন ও ফ্রান্সিস ক্রিক (১৯৫৩) বি-ডিএনএ-র দ্বিতন্ত্রী ডাবল হেলিক্স মডেল প্রস্তাব করেন:

ব্রিটিশ চিকিৎসক ফ্রেডেরিক গ্রিফিথ নিউমোনিয়া সৃষ্টিকারী ব্যাকটেরিয়া Streptococcus pneumoniae-র দুটি রূপভেদ নিয়ে ইঁদুরের ওপর পরীক্ষা চালান:

• S-স্ট্রেন (Smooth / উগ্র বা ক্ষতিকর): পলিস্যাকারাইডের পিচ্ছিল মসৃণ ক্যাপসুল বা আবরণযুক্ত; ইঁদুরের দেহে রোগ প্রতিরোধ ব্যবস্থাকে ফাঁকি দিয়ে নিউমোনিয়া সৃষ্টি করে এবং ইঁদুর মারা যায়।
• R-স্ট্রেন (Rough / অনুগ্র বা নিরীহ): ক্যাপসুলহীন রুক্ষ প্রকৃতির; অ-সংক্রামক, ইঁদুরের দেহে প্রবেশ করালে ইঁদুর সুস্থ থাকে।
• পরীক্ষার ধাপসমূহ:
  • ১. জীবিত S-স্ট্রেন প্রয়োগ $ o$ ইঁদুর মারা গেল।
  • ২. জীবিত R-স্ট্রেন প্রয়োগ $ o$ ইঁদুর বেঁচে রইল।
  • ৩. উত্তাপে মৃত S-স্ট্রেন প্রয়োগ $ o$ ইঁদুর বেঁচে রইল।
  • ৪. উত্তাপে মৃত S-স্ট্রেন + জীবিত R-স্ট্রেন মিশ্রণ প্রয়োগ $ o$ ইঁদুর মারা গেল। মৃত ইঁদুরের রক্ত থেকে জীবিত সংক্রামক S-স্ট্রেন ব্যাকটেরিয়া নিষ্কাশিত হলো!
• সিদ্ধান্ত: গ্রিফিথ প্রস্তাব করেন যে মৃত S-স্ট্রেন থেকে কোনো রাসায়নিক উপাদান জীবিত R-স্ট্রেনে প্রবেশ করে তাকে আবরণযুক্ত S-স্ট্রেনে রূপান্তরিত করেছে। এই উপাদানটিকে তিনি "রূপান্তরকারী নীতি" (Transforming Principle) নাম দেন।

ওসওয়াল্ড অ্যাভেরি, কলিন ম্যাকলিওড এবং ম্যাকলিন ম্যাককার্টি গ্রিফিথের রূপান্তরকারী উপাদানের রাসায়নিক প্রকৃতি নির্ধারণের জন্য পরিশ্রুত নির্যাসের ওপর নির্দিষ্ট উৎসেচক প্রয়োগ করেন:

• নির্যাসে প্রোটিয়েজ (প্রোটিন ধ্বংসকারী) প্রয়োগ $ o$ রূপান্তর অব্যাহত রইল (প্রোটিন বংশগত পদার্থ নয়)।
• নির্যাসে আরএনএ-য়েজ (RNA-ধ্বংসকারী) প্রয়োগ $ o$ রূপান্তর অব্যাহত রইল (RNA বংশগত পদার্থ নয়)।
• নির্যাসে ডিঅক্সিরাইবোনিউক্লিয়েজ (DNase) প্রয়োগ $ o$ রূপান্তর প্রক্রিয়া সম্পূর্ণ বন্ধ হয়ে গেল!
• সিদ্ধান্ত: ডিএনএ-ই হলো প্রকৃত রূপান্তরকারী বংশগত পদার্থ।

অ্যালফ্রেড হার্শি ও মার্থা চেজ ব্যাকটেরিওফায T2 ভাইরাস এবং পোষক Escherichia coli ব্যাকটেরিয়ার সাহায্যে ডিএনএ-র বংশগত ভূমিকা চূড়ান্ত ও নিঃসংশয়ে প্রমাণ করেন:

একটি মানব ডিপ্লয়েড কোষে ($২n$) প্রায় $৬.৬ imes ১০^৯$ ক্ষারক জোড় (bp) থাকে। পাশাপাশি দুটি বেস পেয়ারের ব্যবধান $০.৩৪ imes ১০^{-৯}$ মিটার হওয়ায় মানব কোষের ডিএনএ-র সর্বমোট দৈর্ঘ্য দাঁড়ায়:

$ ext{মোট দৈর্ঘ্য} = ৬.৬ imes ১০^৯ imes ০.৩৪ imes ১০^{-৯} ext{ m} pprox ২.২৪ ext{ মিটার}$

একটি মাত্র মাইক্রোস্কোপিক কোষ নিউক্লিয়াসের ব্যাস যেখানে মাত্র $pprox ১০^{-৬}$ মিটার, সেখানে ২.২৪ মিটার দীর্ঘ ডিএনএ-কে সঠিকভাবে গুটিয়ে রাখতে প্রায় ১০,০০০ গুণ সংকোচন (Compaction) প্রয়োজন। ক্ষারীয় প্রোটিন হিস্টোন-এর সহায়তায় এই প্যাকেজিং সম্পন্ন হয়।

হিস্টোন হলো ধনাত্মক আধানযুক্ত ক্ষারীয় প্রোটিন, যাতে দুটি ক্ষারীয় অ্যামিনো অ্যাসিড—লাইসিন (Lysine) এবং আর্জিনিন (Arginine) প্রচুর পরিমাণে থাকে:

• হিস্টোন অকটামার (Histone Octamer): চারটি হিস্টোন প্রোটিনের প্রতিটি থেকে দুটি করে অণু যুক্ত হয়ে একটি আট-অণুর গোলক গঠন করে: $H_2A$, $H_2B$, $H_3$, এবং $H_4$ (প্রতিটির ২টি করে অণু)।
• ডিএনএ বেষ্টন: ঋণাত্মক আধানযুক্ত ডিএনএ সূত্র হিস্টোন অকটামারের চারদিকে ১.৬৫ বামাবর্তী প্যাঁচে প্রায় ১৪৬টি বেস পেয়ার (146 bp) নিয়ে জড়িয়ে থাকে। একে নিউক্লিওসোম কোর বলে।
• লিঙ্কার ডিএনএ ও $H_1$ হিস্টোন: দুটি সংলগ্ন নিউক্লিওসোমের সংযোগকারী অংশকে লিঙ্কার ডিএনএ (~৫৪ bp) বলে। পঞ্চম হিস্টোন প্রোটিন $H_1$ (লিঙ্কার হিস্টোন) ডিএনএ প্রবেশ ও নির্গমন স্থানে ছিপির মতো অবস্থান করে নিউক্লিওসোমকে স্থিতিশীল করে (মোট ~২০০ bp)।
• বিডস-অন-আ-স্ট্রিং (Beads-on-a-string): ইলেকট্রন অণুবীক্ষণ যন্ত্রের নিচে ক্রোমাটিনকে সুতোয় গাঁথা পুতির মালার মতো দেখায় (১০ nm তন্তু)।

১০ nm তন্তু সলিনয়েড কুণ্ডলীর মাধ্যমে ৩০ nm এবং পরবর্তীতে নন-হিস্টোন ক্রোমোজোমাল (NHC) প্রোটিনের সাহায্যে ৩০০ nm লুপে সজ্জিত হয়। কোষচক্রে ক্রোমাটিন দুটি পৃথক দশায় অবস্থান করে:

ম্যাথু মেসেলসন ও ফ্র্যাঙ্কলিন স্টাল ভারী নাইট্রোজেন আইসোটোপ $^{15} ext{N}$ যুক্ত মাধ্যমে E. coli ব্যাকটেরিয়া প্রতিপালন করে এবং সিজিয়াম ক্লোরাইড ($ ext{CsCl}$) ঘনত্ব নতিমাত্রা সেন্ট্রিফিউগেশনের সাহায্যে প্রমাণ করেন যে ডিএনএ অনুলিপন অর্ধ-রক্ষণশীল (Semi-conservative):

• জনক জনু (Gen 0): $^{15} ext{N}$ মাধ্যমে বৃদ্ধিপ্রাপ্ত ব্যাকটেরিয়া ডিএনএ শতভাগ ভারী ($^{15} ext{N}/^{15} ext{N}$), যা টেস্ট টিউবের নিচে ভারী ব্যান্ড তৈরি করে।
• প্রথম অপত্য জনু (Gen 1 - ২০ মিনিট পর $^{14} ext{N}$ মাধ্যমে): মাত্র একটি রেপ্লিকেশন চক্রের পর প্রাপ্ত সকল ডিএনএ অণু ছিল ১০০% সংকর মধ্যবর্তী ঘনত্বের ($^{15} ext{N}/^{14} ext{N}$)। এর ফলে কনজারভেটিভ বা সম্পূর্ণ রক্ষণশীল মডেল বাতিল হলো (তাতে ১টি ভারী ও ১টি হালকা ব্যান্ড পাওয়া যেত)।
• দ্বিতীয় অপত্য জনু (Gen 2 - ৪০ মিনিট পর): দুটি সমান ব্যান্ড পাওয়া গেল: ৫০% সংকর ($^{15} ext{N}/^{14} ext{N}$) এবং ৫০% হালকা ($^{14} ext{N}/^{14} ext{N}$), যা প্রমাণ করে প্রতিটি নতুন ডিএনএ-তে একটি মাতৃ শৃঙ্খল অপরিবর্তিত থাকে এবং একটি নতুন পরিপূরক শৃঙ্খল তৈরি হয়।
• টেলরের পরীক্ষা (১৯৫৮): ভিশিয়া ফাবা (Vicia faba) গাছের মূলের কোষে তেজস্ক্রিয় ট্রাইশিয়েটেড থাইমিডিন ($^3 ext{H}$-thymidine) ব্যবহার করে প্রমাণ করেন যে ইউক্যারিওট ক্রোমোজোমেও অর্ধ-রক্ষণশীল রেপ্লিকেশন ঘটে।

ডিএনএ রেপ্লিকেশন নির্দিষ্ট স্থান রেপ্লিকেশন অরিজিন (ori) থেকে শুরু হয়। সমগ্র ডিএনএ একসাথে খোলা অসম্ভব হওয়ায় এটি একটি Y-আকৃতির রেপ্লিকেশন ফর্ক গঠন করে যাতে বিভিন্ন উৎসেচক সমন্বিতভাবে কাজ করে:

• ডিএনএ হেলিকেজ (DNA Helicase): এটিপি খরচ করে ডাবল হেলিক্সের হাইড্রোজেন বন্ধন ভেঙে দুটি সূত্রকে পৃথক করে।
• এসএসবি প্রোটিন (SSB): একক তন্ত্রী ডিএনএ-র সাথে যুক্ত হয়ে দুটি শৃঙ্খলকে পুনরায় জোড়া লাগতে বাধা দেয়।
• টপোআইসোমারেজ (প্রোক্যারিওটে ডিএনএ জাইরেজ): রেপ্লিকেশন ফর্কের সম্মুখবর্তী অংশের অতিরিক্ত প্যাঁচ ও টান দূর করে।
• আরএনএ প্রাইমেজ (RNA Primase): ক্ষুদ্র আরএনএ প্রাইমার (প্রায় ১০ নিউক্লিওটাইড) তৈরি করে যাতে ডিএনএ পলিমারেজের যুক্ত হওয়ার জন্য উন্মুক্ত ৩'-OH প্রান্ত পাওয়া যায়।
• ডিএনএ পলিমারেজ III: প্রধান অনুলিপনকারী উৎসেচক; ৫' $ o$ ৩' অভিমুখে প্রতি সেকেন্ডে প্রায় ২০০০ bp গতিতে পলিমারাইজেশন সম্পন্ন করে এবং ৩' $ o$ ৫' এক্সোনিউক্লিয়েজ দ্বারা প্রুফরিডিং করে।
• ডিএনএ পলিমারেজ I (Kornberg Enzyme): ৫' $ o$ ৩' এক্সোনিউক্লিয়েজ ক্ষমতার মাধ্যমে আরএনএ প্রাইমার অপসারণ করে শূন্যস্থানে ডিএনএ নিউক্লিওটাইড বসায়।
• ডিএনএ লাইগেজ: ওকাজাকি খণ্ডগুলির মাঝের ফসফোডাইএস্টার বন্ধন জুড়ে দিয়ে নিরবচ্ছিন্ন শৃঙ্খল তৈরি করে।

যেহেতু ডিএনএ পলিমারেজ কেবলমাত্র ৫' $ o$ ৩' অভিমুখে নিউক্লিওটাইড জুড়তে পারে, তাই বিপরীতমুখী সমান্তরাল ছাঁচে দুটি শৃঙ্খল ভিন্ন নিয়মে সংশ্লেষিত হয়:

ফ্রান্সিস ক্রিক (১৯৫৮) সেন্ট্রাল ডগমার ধারণা দেন: ডিএনএ থেকে বার্তাবহ আরএনএ তৈরি (ট্রান্সক্রিপশন) এবং আরএনএ থেকে পলিপেপটাইড প্রোটিন তৈরি (ট্রান্সলেশন)। রিভার্স ট্রান্সক্রিপশনে আরএনএ থেকে ডিএনএ তৈরি হয়। ডিএনএ-র একটি ট্রান্সক্রিপশন এককে তিনটি প্রধান অংশ থাকে:

• প্রমোটর (Promoter): গাঠনিক জিনের ৫' প্রান্তে অবস্থিত যে অংশে আরএনএ পলিমারেজ যুক্ত হয় (যেমন ব্যাকটিরিয়ায় -১০ স্থানে Pribnow বক্স TATAAT; ইউক্যারিওটে -২৫ স্থানে TATA বক্স বা Hogness বক্স)।
• গাঠনিক জিন (Structural Gene): ৩' $ o$ ৫' প্রান্তযুক্ত শৃঙ্খলটি ছাঁচ বা টেমপ্লেট শৃঙ্খল (Antisense strand) হিসেবে কাজ করে। বিপরীত ৫' $ o$ ৩' শৃঙ্খলটিকে কোডিং শৃঙ্খল (Sense strand) বলে (যার ক্রম উৎপাদিত mRNA-র অনুরূপ, কেবল T-এর স্থলে U বসে)।
• টার্মিনেটর (Terminator): ট্রান্সক্রিপশন সমাপ্তির সংকেত অঞ্চল।

ইউক্যারিওটিক কোষে নিউক্লিয়াসে তিনটি প্রধান আরএনএ পলিমারেজ বিদ্যমান: RNA Pol I (২৮S, ১৮S, ৫.৮S rRNA তৈরি করে), RNA Pol II (বার্তাবহ mRNA-র পূর্বসূরি hnRNA তৈরি করে), এবং RNA Pol III (tRNA, ৫S rRNA ও snRNA তৈরি করে)। hnRNA থেকে পরিণত mRNA তৈরিতে তিনটি পরিবর্তন ঘটে:

• ক্যাপিং (৫' Capping): hnRNA-র ৫' প্রান্তে একটি অস্বাভাবিক নিউক্লিওটাইড ৭-মিথাইল গুয়ানোসিন ট্রাইফসফেট ($m^7 ext{Gppp}$) যুক্ত হয় যা আরএনএ-কে এনজাইমের অবক্ষয় থেকে রক্ষা করে।
• টেইলিং (৩' Tailing): ৩' প্রান্তে টেমপ্লেট ছাড়াই ২০০–৩০০টি অ্যাডিনাইলেট অবশিষ্টাংশ যুক্ত হয়ে পলি-A লেজ গঠন করে।
• স্প্লাইসিং (Splicing): ইউক্যারিওটিক জিন খণ্ডিত জিন (Split genes) হওয়ায় এতে কার্যকারী এক্সন (Exons) এবং অকার্যকর ইন্ট্রন (Introns) থাকে। স্প্লাইসিওসোম (snRNPs) দ্বারা ইন্ট্রনগুলি কেটে বাদ দেওয়া হয় এবং এক্সনগুলি লাইগেশনের মাধ্যমে যুক্ত হয়ে পরিণত mRNA গঠন করে।

নিরেনবার্গ, হরগোবিন্দ খোরানা ও সেভেরো ওচোয়ার গবেষণায় আবিষ্কৃত ট্রিপলেট জেনেটিক কোডের মূল বৈশিষ্ট্যসমূহ:

ট্রান্সলেশন প্রক্রিয়ায় mRNA-র সংকেত অনুযায়ী রাইবোজোমে পলিপেপটাইড শৃঙ্খল সংশ্লেষিত হয়:

• অ্যামিনো অ্যাসিড সক্রিয়করণ ও tRNA চার্জিং: অ্যামিনোঅ্যাসাইল-tRNA সিন্থেটেজ উৎসেচক এটিপি ব্যবহার করে অ্যামিনো অ্যাসিডকে নির্দিষ্ট tRNA-র ৩'-CCA প্রান্তে যুক্ত করে (অ্যামিনোঅ্যাসাইলেশন)।
• প্রারম্ভিক দশা (Initiation): রাইবোজোমের ক্ষুদ্র উপ-একক mRNA-র সাথে যুক্ত হয়; প্রারম্ভিক tRNA P-সাইটে এসে AUG কোডনের সাথে যুক্ত হয়। এরপর বৃহৎ উপ-একক যুক্ত হয়।
• দীর্ঘকরণ (Elongation): পরবর্তী অ্যামিনোঅ্যাসাইল-tRNA A-সাইটে প্রবেশ করে। পেপটাইড বন্ধন গঠনে সহায়তা করে বৃহৎ উপ-এককের রাইবোজাইম পেপটাইডিল ট্রান্সফারেজ (ব্যাকটেরিয়ায় ২৩S rRNA; ইউক্যারিওটে ২৮S rRNA)। এরপর রাইবোজোম ৫' $ o$ ৩' অভিমুখে এগিয়ে যায় (ট্রান্সলোকেশন)।
• সমাপ্তি (Termination): স্টপ কোডন (UAA, UAG, UGA) A-সাইটে এলে রিলিজ ফ্যাক্টর (RF) যুক্ত হয়ে পলিপেপটাইড শৃঙ্খলকে মুক্ত করে।

ফ্রাঁসোয়া জ্যাকব ও জাক মোনড E. coli ব্যাকটেরিয়ায় ল্যাকটোজ বিপাকের জন্য ল্যাক অপেরন (Lac Operon) মডেল আবিষ্কার করেন:

হিউম্যান জিনোম প্রজেক্ট (HGP, ১৯৯০–২০০৩): মানব জিনোমের সম্পূর্ণ ৩ বিলিয়ন ($৩ imes ১০^৯$) ক্ষারক জোড় সিকোয়েন্সিংয়ের মেগা প্রজেক্ট:

• মানব জিনোমে প্রায় ৩১64.৭ মিলিয়ন বেস পেয়ার এবং আনুমানিক ২০,০০০–২৫,০০০টি জিন রয়েছে।
• গড় জিন আকার ৩০০০ ক্ষারক; বৃহত্তম মানব জিন হলো এক্স-ক্রোমোজোমে অবস্থিত ডিস্ট্রোফিন (Dystrophin - ২.৪ মিলিয়ন বেস)।
• ১ নম্বর ক্রোমোজোমে সর্বাধিক (২,৯৬৮টি) এবং Y ক্রোমোজোমে সর্বনিম্ন (২৩১টি) জিন রয়েছে। মোট জিনোমের ২%-এরও কম অংশ প্রোটিন তৈরির সংকেত বহন করে।

ডিএনএ ফিঙ্গারপ্রিন্টিং (স্যার অ্যালেক জেফ্রিস, ১৯৮৪): স্যাটেলাইট ডিএনএ-র পুনরাবৃত্তিমূলক VNTR (Variable Number of Tandem Repeats) পলিমরফিজমের ওপর ভিত্তি করে ব্যক্তি সনাক্তকরণ পদ্ধতি:

• ধাপ ১: রক্ত, বীর্য বা চুলের মূল থেকে ডিএনএ নিষ্কাশন ও শোধন।
• ধাপ ২: রেস্ট্রিকশন এন্ডোনিউক্লিয়েজ দ্বারা ডিএনএ-কে নির্দিষ্ট স্থানে কর্তন।
• ধাপ ৩: অ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা খণ্ডগুলির আকারানুসারে পৃথকীকরণ।
• ধাপ ৪: ক্ষার দ্বারা একসূত্রী করে নাইলন ঝিল্লিতে স্থানান্তর (সাদার্ন ব্লটিং)।
• ধাপ ৫: তেজস্ক্রিয় $^{32} ext{P}$-চিহ্নিত VNTR প্রোবের সাথে সংকরায়ণ (Hybridization)।
• ধাপ ৬: এক্স-রে ফিল্মে অটোরেডিওগ্রাফি দ্বারা বারকোডের মতো দৃশ্যমান ব্যান্ডের প্যাটার্ন পর্যবেক্ষণ (অপরাধী শনাক্তকরণ ও পিতৃত্ব নির্ধারণে ১০০% নির্ভরযোগ্য)।